本篇文章给大家谈谈抗原修复,以及抗原修复微波炉加热多久对应的知识点,希望对各位有所帮助,不要忘了收藏本站喔。
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免疫荧光抗原修复的目的
免疫荧光抗原修复是一种实验技术,旨在增强细胞或组织中的抗原信号,从而提高荧光显微镜观察结果的准确性和灵敏度。通常情况下,免疫荧光抗原修复完成后,可以对样本进行后续处理,包括干片。
通透液起的作用是抗原修复,也就是说它破坏切片组织细胞的细胞膜和核模,以便与抗体从而可以进入细胞与相应抗原结合。这两步对免疫组化结果都很重要。
免疫荧光当然冰冻切片较好,但石蜡切片同样可以做出来的。
你体到的柠檬酸钠溶液熏蒸其实是抗原修复的一种方法,也是最常用的,尤其是醛类固定的标本,这个方法就是通过该缓冲液在适当温度、时间、PH、以及离子浓度下解交联、变性延申蛋白,从而达到上面体到的暴露抗原表位的目的。
一般石蜡组织切片要严格执行抗原修复操作,冰冻切片有人不做抗原修复但是能够得到理想的实验效果。推荐购买厂家已经验证过免疫荧光的抗体(义翘的坚持“有图有真相”),然后参考厂家提供的实验操作建议,例如修复方法等等。
常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。
为什么抗原修复只针对石蜡切片,而不是冰冻切片?
1、抗原修复只针对石蜡切片,而不是冰冻切片因切片进行抗原修复来提高免疫活性和染色效果。
2、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好,而石蜡切片在组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。从操作步骤的繁琐程度看。
3、冰冻切片一般不需要抗原修复,石蜡切片需要抗原修复。
4、冰冻切片和石蜡切片区别是冰冻切片操作便捷性高,能很好保持抗原活性、脂肪、类脂成分。石蜡切片组织形态好,能切更大组织,切片厚度薄,连片性好,保存年限更长。
5、所以石蜡切片对组织抗原性要求较高,但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散。
6、免疫荧光当然冰冻切片较好,但石蜡切片同样可以做出来的。
抗原修复盒可以用微波炉加热吗
1、不过具体问题具体分析,看不同的切片,有不同的修复条件,有的可能不适合高温高压,建议先选择微波炉或者水浴修复,预实验看看效果。
2、· 将玻片放入装有抗原修复液的容器中,置微波炉加热至95℃以上,持续l0~15分钟,冷却后,按免疫组化染色步骤进行。
3、有些塑料盒可以用微波炉加热。不过需要注意的是,外面有三角箭头,盒内有数字5的PP材质的塑料盒,可以用微波炉加热。此外,微波炉加热可以使用特殊的瓷器、陶器、耐热玻璃、聚丙烯和聚乙烯容器。
4、进行抗原修复:将切片置于0.1mol/L且ph=0的枸橼酸液修复液中,用微波炉100火力三分钟至微微沸腾,再用50火力维持7分钟,停止加热后自然冷却20-30分钟。
抗原修复没有提前预热会怎么样
1、如果没有提前预热,修复液的温度可能不够,导致修复过程中的化学速率降低,抗原修复效果不佳。
2、抗原变性、免疫反应降低。抗原变性:抗原在高温下长时间加热,会发生变性,失去原有的免疫原性,会影响抗原在免疫反应中的效果和作用。免疫反应降低:过长的热抗原修复时间会导致免疫反应降低。
3、免疫组化抗原修复液水浴锅加热未沸腾关掉再继续加热不会有影响。免疫组化抗原修复液是一种常用的试剂,其中含有一些敏感的蛋白质成分,需要在加热过程中进行修复。
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